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泥鳅一般2龄时开始性成熟。其繁殖季节是4-9月，6-7月为繁殖盛期。通常情况，19℃以上开始产卵，24℃左右产卵量大，繁殖活动强烈。泥鳅是一年多次产卵的鱼类，产卵常在雨后夜间进行，有时白天也产。产卵活动期间，泥鳅胆子较大，常到水面上来追逐。泥鳅卵有黏性，卵在水中受精后，粘在水草或水中杂物上孵化，落入水底的受精卵也能孵出仔鳅。雌鳅的怀卵量除个体差异外，与其体长有很大关系：体长8厘米的雌鳅怀卵量约为2000粒，体长10厘米的雌鳅怀卵量约为7000粒，体长12厘米的雌鳅怀卵量约为13000粒，体长15厘米的雌鳅怀卵量约为15000粒，体长20厘米的雌鳅怀卵量约为24000粒。泥鳅的卵为圆形，米黄色，半透明，卵径0.8-1毫米，吸水后达1.2-1.5毫米。水温20℃以上时，孵化期为2-4天。
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