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2001年,尹馨出演了由周渝民、朱孝天、伊能静等主演的青春校园喜剧《贫穷贵公子》,由此出道演艺圈。2003年,参演了由郑文堂执导,徐乐眉、梅芳、朱陆豪等主演的时代情感剧《寒夜续曲》,尹馨饰演由弱女子转变成坚强女性的“林阿贞”。2004年,出演了由林合隆执导,许绍洋、陆明君、婷婷等主演的都市言情剧《靓女郎》。2005年,与谭俊彦、范文芳领衔主演了由张国甫执导的剧情片《龙眼粥》,影片在第14届金鸡百花电影节港台影展首次公开放映,尹馨也由此被大陆观众所知。2007年4月1日,与张智霖、张达明、蒋雅文等主演的犯罪电影《人在江湖》上映,尹馨在片中饰演性感火辣而命运多劫的“志玲”;9月4日,搭档李康生主演的剧情片《帮帮我爱神》上映,尹馨饰演有“槟郎西施”之称的漂亮女孩“小萱”,影片入围第64届威尼斯国际电影节金狮奖。2008年5月1日,与陈宝国、李立群、唐笑笑等共同主演的都市轻喜剧《穷爸爸富爸爸》播出,尹馨饰演的“祝美杉”是一个成功的商人,却不是一个幸福的女人。随后,主演的爱情电视电影《与男友的前女友密谈》播出,尹馨因此获得了第43届台湾电视金钟奖迷你剧集女主角提名,又因为与导演陈慧翎共同负责了该片的编剧工作,而获得了迷你剧集编剧奖、。2009年,出演了由戴君竹、林佑威、黄鸿升等主演的爱情剧《我在1949,等你》。2012年9月21日,出演的剧情片《逆光飞翔》上映;12月8日,与梁修身、陈慕义、潘丽丽等共同主演的剧情类电视电影《权力过程》播出,尹馨凭借该片获得了第15届台北电影节最佳女配角奖。2013年,尹馨与林庆台搭档,主演了由赖孟杰执导的动作电视剧《城市·猎人》。2014年2月11日,出演的爱情偶像剧《女人30情定水舞间》播出;随后与高盟杰共同出演了爱情电视电影《回家的女人》,并因此获得了第49届台湾电视金钟奖迷你剧集/电视电影女主角奖、。2017年5月8日,由江丰宏执导,周雨彤、侯明昊、贺军翔等人主演的黑色悬疑网络剧《寒武纪》首播,尹馨在剧中饰演有野心有能力的董事长遗孀“金琳”;11月22日,与郑人硕、蔡祥领衔主演的剧情类电视电影《川流之岛》播出,尹馨饰演中年失婚又遭裁员的母亲“阿雯”,凭借该角色获得了第51届台湾电视金钟奖迷你剧集/电视电影女主角奖、第19届台北电影节最佳女主角奖。